小鼠腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒

產(chǎn)品型號： WBC1092Z

所屬分類(lèi)：分離液試劑盒

產(chǎn)品時(shí)間：2023-07-23

簡(jiǎn)要描述：本品用于分離小鼠腫瘤浸潤組織白細胞
為方便廣大用戶(hù)使用，試劑內容如下：
A各種動(dòng)物組織白細胞分離液詳見(jiàn)附錄1100ml
BF液（贈品）F2013TBD100ml
C紅細胞裂解液（贈品）NH4CL2009100ml
D全血及組織稀釋液（贈品）2010C1119100ml
E細胞洗滌液（贈品）2010X1118100ml

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小鼠腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒（細胞培養及分子生物學(xué)）說(shuō)

明書(shū)

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶(hù)使用，試劑內容如下：

 名稱(chēng) 產(chǎn)品編號 規格

A 各種動(dòng)物組織白細胞分離液 詳見(jiàn)附錄 1 100ml

B F 液（贈品） F2013TBD 100ml

C 紅細胞裂解液（贈品） NH4CL2009 100ml

D 全血及組織稀釋液（贈品） 2010C1119 100ml

E 細胞洗滌液（贈品） 2010X1118 100ml

注：本試劑內容中各單品可根據貨號單獨購買(mǎi)，客戶(hù)可根據實(shí)際使用情況自行選擇購買(mǎi)。

【預期用途】

適用于從動(dòng)物組織中分離白細胞，無(wú)菌條件下所分離的白細胞可用于分子生

物學(xué)及細胞培養等。本品僅供科研使用。

【檢驗原理】

本分離液為 FICOLL、羥乙一基淀粉 550 與泛影酸葡甲胺的混合液?？鼓?/span>

可在分離液中分層。離心時(shí)，在 FICOLL、羥乙一基淀粉的作用下紅細胞與粒細胞

聚集并迅速沉降；此時(shí)，白細胞仍處于分離液上層及分離液層，紅細胞污染可通

過(guò)紅細胞裂解液裂解紅細胞去除。大部分血小板可在細胞清洗低速離心過(guò)程中去

除。

其他人及動(dòng)物多種比重細胞分離液，因不同種屬不同比重分離液的細胞離散

系數及細胞帶電不同，用戶(hù)在制定分離液時(shí)應提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬

及被分離細胞的名稱(chēng)。

【*但不提供的儀器及耗材】

可提供 400g 離心力的水平轉子離心機、15ml 玻璃離心管、吸管及標準胎牛血清

（產(chǎn)品編號：TBD31HB）等。

【注意事項】

1. 使用前，本分離液需復溫至 18-22℃。為獲得*的實(shí)驗結果，在獲得

樣本 2 小時(shí)內進(jìn)行實(shí)驗，存放時(shí)間越長(cháng)細胞活性越低。

2. 實(shí)驗過(guò)程中，如需勻漿組織或洗滌細胞，不可使用含 Ca、Mg 離子的緩沖液及

培養液，其成分會(huì )大大降低細胞得率及純度。本公司生產(chǎn)的全血及組織稀釋液和

細胞洗滌液不含 Ca、Mg 離子、低內毒素水平且含細胞和保護成分，推薦使用。

3. *抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素，其他抗凝劑也可使用，但會(huì )影響細

胞活性。

4. 實(shí)驗操作時(shí)，不可使用含粉手套、不可使用內毒素含量過(guò)高的液體，手套中

的粉末顆粒及高內毒素會(huì )激活細胞從而降低細胞得率及活性。建議使用天津灝洋

配套相關(guān)產(chǎn)品。

5. 本實(shí)驗不可使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，其帶有的靜電作用

將導致細胞貼壁影響分離效果。

6. 吸取過(guò)多的白細胞層及分離液層會(huì )導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使

混雜的粒細胞數量增加。

7. 吸取過(guò)多的白細胞層上層溶液會(huì )導致血漿蛋白及血小板混雜。

8. 如需進(jìn)行細胞計數，則需樣本貯藏時(shí)間不得多于 10 小時(shí)，否則將導致細胞被

激活，得率降低。

9. 為去除所混雜的血小板，可在分離液上層加上 4-20%蔗糖梯度等滲溶液進(jìn)行

二次離心。

10. 細胞純度可在步驟 10 后使用瑞氏染色方法確定，細胞活性可用臺盼藍處理

后觀(guān)察。

11. 如所實(shí)驗后細胞得率或活性過(guò)低，請天津灝洋以尋求幫助，具

體詳見(jiàn)“【生產(chǎn)企業(yè)】”項目下內容。

【組織單細胞懸液的制備方法】

注： A. 組織勻漿液需先用現配，配制方法為：40ml 胎牛血清與 60mlF 液混勻，備用（現

用現配）。

B．本試劑盒中不包含膠原酶，若采用酶消化法制備單細胞懸液，請用戶(hù)根據各實(shí)驗

室要求另購不同類(lèi)型膠原酶。

Ⅰ. 剪碎法：將組織塊放入平皿后，加入少量組織勻漿液；用眼科剪將組織剪至

勻漿狀，加入 5ml 組織勻漿液；用吸管吸取組織勻漿，用 100 目不銹鋼濾網(wǎng)(另

購)過(guò)濾到試管內；離心沉淀 1500 轉/分×3 min，再用細胞洗滌液清洗 3 次，每

次以 500rpm 短時(shí)低速離心除去細胞碎片，以 200 目不銹鋼濾網(wǎng)（另購）過(guò)濾去

細胞團塊。作細胞計數并調整細胞濃度為（2～5）×107個(gè)/ml。常溫下放置, 待

測細胞的活力。分離前用全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108

-1×109個(gè)/ml

的單細胞懸液備用。

Ⅱ. 勻漿器法：用眼科剪將組織剪成小塊；放入 70ml 組織研磨器內，加入 2ml

組織勻漿液；緩慢轉動(dòng)研棒，研磨至勻漿；用 5ml 組織勻漿液沖洗研器；收集細

胞懸液，經(jīng) 200 目不銹鋼濾網(wǎng)（另購）過(guò)濾；離心沉淀 800rpm×2min ，再用細

胞洗滌液洗 3 次，離心沉淀。作細胞計數并調整細胞濃度為（2～5）×107個(gè)/ml。MANUFACTURE CO.,LTD - 3 -

www.tbdscience.com◆:gx

灝洋生物 TBDsciences

常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108

-1×109個(gè)/ml 的單細胞懸液備用。

Ⅲ. 酶消化法：

A． 用 F 液將膠原酶稀釋?zhuān)K濃度為 400 U/ml，至于冰浴備用。

B． 取一適當大小培養皿進(jìn)行操作：用鑷子夾碎動(dòng)物脾臟，加入稀釋后的膠原酶，

37℃消化 20 分鐘。

C． 以 100 或 200 目不銹鋼濾網(wǎng)（另購）過(guò)濾，離心沉淀 800prm×2min ，再用

細胞洗滌液洗 3 次，離心沉淀。作細胞計數并調整細胞濃度為（2～5）×107

個(gè)/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用全血及組織稀釋液懸起細

胞濃度為 2×108

-1×109個(gè)/ml 的單細胞懸液備用。

細胞計數方法:

細胞計數法是用來(lái)計數細胞懸液中細胞數量的一種方法。一般利用計數板

（血球計數板）進(jìn)行。既可用于分離（散）細胞培養接種前計數所制備的細胞懸

液中的細胞數量，也可用于對培養物的細胞數量進(jìn)行計數。不論計數的對象如何，

均須制備分散的細胞懸液。

計數與計算過(guò)程

1）、在細胞計數板中央放置計數的蓋玻片。

2）、用玻璃虹吸管吸取細胞，讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數板凹蹧處流

出懸液，至蓋玻片被液體充滿(mǎn)為止。

3）、置顯微鏡下計數四角大方格內的細胞總數。對于壓線(xiàn)的細胞只計數在上

線(xiàn)和左線(xiàn)者，對于細胞團按單個(gè)細胞計數。

4）、按下式計數細胞懸液的密度：

細胞密度＝（4 個(gè)大格細胞總數/4）×104個(gè)/ml×稀釋倍數

公式中乘以 104因為計數板中每一個(gè)大格的體積為：

1.0mm（長(cháng)）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）＝0.1mm3 而 1ml＝1000mm3

細胞計數要點(diǎn)：

A． 進(jìn)行細胞計數時(shí)，要求懸液中細胞數目不低于 104個(gè)/ml，如果細胞數目很

少要進(jìn)行離心再懸浮于少量培養液中；顯微鏡下計數時(shí)，遇到 2 個(gè)以上細胞組成

的細胞團，應按單個(gè)細胞計算。如果細胞團>10％，說(shuō)明細胞分散不充分; 或細

胞數<200 個(gè)/10mm2或>500 個(gè)/10 mm

2 時(shí)，說(shuō)明稀釋不當，需重新制備細胞懸液。

B． 要求細胞懸液中的細胞分散良好，否則影響計數準確性。

C． 取樣計數前，應充分混勻細胞懸液，尤其是多次取樣計數時(shí)更要注意每次

取樣都要混勻，以求計數準確；

D． 數細胞的原則是只數完整的細胞，若細胞聚集成團時(shí)，只按照一個(gè)細胞計

算。如果細胞壓在格線(xiàn)上時(shí)，則只計上線(xiàn)，不計下線(xiàn)，只計左線(xiàn)，不計右線(xiàn)。

E． 操作時(shí)，注意蓋玻片下不能有氣泡，也不能讓?xiě)乙毫魅肱赃叢壑?，否則要

重新計數。

初學(xué)者易犯的錯誤：

A． 計數前未將待測懸液吹打均勻。

B． 滴入細胞懸液時(shí)蓋玻片下出現氣泡。

C． 滴入懸液時(shí)的量太多，至使細胞懸液流入旁邊的槽中。

【檢驗方法】

1. 取一支 15ml 離心管，加入 3ml 分離液置于 18-22℃。

2. 取 3ml 細胞懸液小心加于分離液之液面上。18-22℃，400g 離心 20 分鐘。低

溫（如 4 度）離心會(huì )降低細胞得率。

3. 離心后，用吸管小心吸出分離液上層（包含白細胞的細胞層）0.5cm 以上的

上清液部分，棄去。

4.用吸管小心吸取分離液層、白細胞層及紅細胞層置于另一新離心管內。

5. 在步驟 4 中所得離心管中加入 10ml 細胞洗滌液（產(chǎn)品編號：2010X1118）混

勻。

6. 250g 離心 10 分鐘。

7. 棄上清，沉淀使用紅細胞裂解液（Cat#：NH4CL2009）裂解紅細胞（裂解過(guò)程

參見(jiàn)下述【紅細胞裂解液使用說(shuō)明】）。

8. 裂解后再經(jīng)三次洗滌去除紅細胞內溶物和碎片后即為所需白細胞。

9.后以 0.5ml 后續試驗所需相應液體重懸細胞。

WBC Separation Medium

【紅細胞裂解液使用說(shuō)明】

本裂解液有別于市場(chǎng)上銷(xiāo)售的其它紅細胞裂解液，其配方經(jīng)過(guò)本公司優(yōu)化在裂解紅細

White Blood

Cell

20 Minutes

Cell Suspension Diluentwww.tbdscience.com

本品只能用于科學(xué)研究，不能用于臨床檢測

胞的同時(shí)不損傷并在一定程度上保護淋巴細胞(lymphocyte)或其它有細胞核的細胞，所獲

得的細胞可保持完好的生物活性和完整的細胞形態(tài)。另外，本裂解液中無(wú)DNA及RNA酶，配

合細胞分離液使用所提細胞可廣泛用于細胞培養及分子生物學(xué)實(shí)驗，請廣大用戶(hù)從優(yōu)選擇。

紅細胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)，也稱(chēng)ACK Lysis Buffer，是一種用于

從人或鼠等的血液或組織細胞樣品中裂解并去除無(wú)細胞核紅細胞的溶液。

本裂解液不適用于有細胞核紅細胞的裂解，例如鳥(niǎo)或禽類(lèi)的紅細胞。本裂解液經(jīng)過(guò)無(wú)菌

處理，處理過(guò)的血液或組織細胞樣品可以用于后續的原代培養、細胞融合以及核酸或蛋白的

提取及各種常規的分析和檢測。

使用說(shuō)明：

A. 對于組織細胞樣品：

a. 新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理，通過(guò)適當方法分散成細胞懸液，離心棄上清。

b. 加入3-5倍細胞體積的紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體

積為1ml，則加入3-5ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。

c. 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

d. 如果發(fā)現紅細胞裂解不*，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不

會(huì )影響后續的一些檢測。

e. 洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液，重懸沉淀，400-500g離心

2-3分鐘，棄上清?？稍僦貜?/span>1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀

體積的5倍。4℃離心效果更佳。

f. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。

B. 對于組織細胞樣品無(wú)需洗滌的快速操作步驟：

a. 新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理，通過(guò)適當方法分散成細胞懸液，離心棄上清。

b. 對于0.2ml細胞沉淀加入1ml紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。本步驟在室溫

或4度操作均可。

c. 加入15-20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液，混勻。

d. 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

e. 如果發(fā)現紅細胞裂解不*，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不

會(huì )影響后續的一些檢測。

f. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。

注：對于常規步驟，多一步洗滌過(guò)程中的離心，但可以節省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，

時(shí)不需要大體積的離心管?？焖俨襟E少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時(shí)需要大體積的離心管。

C. 對于血液樣品：

a. 取新鮮抗凝血，400-500g離心5分鐘，離心棄上清。

b. 加入6-10倍細胞體積的紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體

積為1ml，則加入6-10ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意：對于鼠

的血液，裂解1-2分鐘已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長(cháng)裂解時(shí)間至4-5分鐘，并且裂

解過(guò)程中宜適當偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細胞裂解。

c. 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

d. 如果發(fā)現紅細胞裂解不*，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不

會(huì )影響后續的一些檢測。

e. 洗滌1-2次：加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液，重懸沉淀，400-500g離心

2-3分鐘，棄上清?？稍僦貜?/span>1次，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀

體積的5倍。4℃離心效果更佳。

f. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。

注：對于微量或少量的血液樣品，可以在*步中不進(jìn)行離心棄上清的操作，直接在第二步中加入10倍血

液體積的紅細胞裂解液，并在室溫或4℃裂解4-5分鐘。對于鼠的血液，裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠，對于人的外

周血，宜延長(cháng)裂解時(shí)間至10分鐘，但通常不宜超過(guò)15分鐘，并且裂解過(guò)程中宜適當偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細胞

裂解。后續步驟相同。

D. 對于血液樣品無(wú)需洗滌的快速操作步驟：

a. 每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解4-5分鐘。本步驟在室

溫或4度操作均可。注意：對于鼠的血液，裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜

延長(cháng)裂解時(shí)間至10分鐘，但通常不宜超過(guò)15分鐘，并且裂解過(guò)程中宜適當偶爾搖動(dòng)以促

進(jìn)紅細胞裂解。

b. 加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養液，混勻。

c. 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

d. 如果發(fā)現紅細胞裂解不*，可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不

會(huì )影響后續的一些檢測。

e. 根據實(shí)驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進(jìn)行計數等后續實(shí)驗。

注：對于常規步驟，多一步洗滌過(guò)程的離心，但可以節省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些，同時(shí)

不需要大體積的離心管?？焖俨襟E少了一次離心，但洗滌效果略差一些，同時(shí)需要大體積的離心管。

【儲存條件及有效期】 www.tbdscience.com

18-25℃避光保存，有效期 2 年。啟封后置 4℃保存，溶液變渾濁或感染細

菌時(shí)，產(chǎn)品失效。本品為真空包裝，未啟封前置于 10℃ 以下易出現白色結晶，

影響分離效果。

【適用儀器】

半徑 15cm 水平轉子離心機。

【樣本要求】

本分離液要求樣本為新鮮的細胞懸液，樣本收集時(shí)應無(wú)菌操作且在儲存、處

理和運輸過(guò)程中避免冷凍和冷藏。

【參考值（參考范圍）】

本實(shí)驗白細胞的提取率及純度均大于 80%。

【檢驗結果的解釋】

由于各品牌離心機的性能不同，國內南北地區溫度環(huán)境和四季的差異，可能

影響分離效果，用戶(hù)可以調節離心轉數和離心的時(shí)間，摸索*的分離條件（具

體分離條件各實(shí)驗室自定）。

【檢驗方法的局限性】

本試驗要求，在正常大氣壓下，樣本、分離液及分離環(huán)境溫度為 18-22℃。

本分離液在低溫時(shí)呈較高密度，在高溫時(shí)呈較低密度。

【產(chǎn)品性能指標】

pH 7.0-7.5

滲透壓 280-340mOsmol/kg

無(wú)菌 直接接種培養 14 天后培養基澄清

澄明度及不溶性顆粒物 每 50ml 溶液中含 10μ m 以上的不溶性微粒 20 粒以

下，含 25μ m 以上的不溶性微粒 5 粒以下

【參考文獻】

1 鄭德先，吳克復，褚建新.現代實(shí)驗血液學(xué)研究方法與技術(shù).北京醫科大學(xué)

協(xié)和醫科大學(xué)聯(lián)合出版社，1999

2 鄂征.組織培養.北京出版社，1995

3 朱立平，陳學(xué)清.免疫學(xué)常用實(shí)驗方法.人民軍醫出版社，2000